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近日,中科院大连化物所研究员葛广波、杨凌团队研发了一种全新的二肽基肽酶-IV(DPP-IV, CD26)高特异性荧光探针,并将其用于人血及组织中DPP-IV的活性检测以及活细胞和组织层面的目标酶功能成像研究,相关研究成果发表在《生物传感器与生物电子学》上。
DPP-IV是哺乳动物体内分布的一种重要的丝氨酸水解酶,其参与体内多种生物活性多肽的水解进而导致其部分或完全失活。DPP-IV可快速水解胰高血糖素样肽-1进而影响胰高血糖素的合成与分泌,因此在糖代谢过程中扮演重要角色,被认为是Ⅱ型糖尿病治疗的关键靶点。建立适用于复杂生物样品中DPP-IV活性的高效且实用的检测方法,对于糖尿病治疗药物筛选和临床个性化用药以及DPP-IV表达/功能异常与疾病的关联性研究等具有重要意义。
研究人员基于DPP-IV的酶催化特性,研发了一种全新的高特异性双光子荧光探针底物GP-BAN,并开发了利用微孔板高通量检测复杂生物样本中DPP-IV活性的超灵敏检测方法。特异性高,可直接用于血样、细胞及组织等复杂生物样品中DPP-IV的检测;操作简单且可实现高通量检测,单位测试成本低;检测灵敏度高、样品需求量小,如血液样品只需2μL;可通过比率法进行目标酶的活性检测,抗干扰能力强。
利用该探针不仅可实现活细胞及活组织中目标酶的精确定位及实时动态检测,还可以血液为酶源开展DPP-IV抑制剂的高通量筛选与表征。为新药研发及临床DPP-IV抑制剂的个性化用药提供了新的工具,也为后续开发商业化的DPP-IV生化检测试剂盒奠定了工作基础。
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