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最新高二生物下册《DNA的粗提取与鉴定》考点聚焦
来源: 查字典生物网| 2018-08-06 发表| 19 人浏览| 教学分类:生物知识大全

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查字典生物网为大家整理了DNA的粗提取与鉴定考点聚焦,希望大家跟着小编的思路归纳知识点和小编一起来学习吧。

一、考点知识解读

1.实验原理

(1)粗提取原理:在NaCl溶液浓度低于0.14mol/L时,DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而降低;在0.14mol/L时,DNA的溶解度最小;当NaCl溶液浓度继续增加时,DNA溶解度又增大。

(2)纯化原理:DNA不溶于酒精,但细胞中的某些蛋白质溶于酒精。

(3)鉴定DNA原理:在沸水浴条件下,DNA遇二苯胺会被染成蓝色。

2.实验材料的选择及处理

(1)不选择猪血等哺乳动物的血液,因为哺乳动物成熟的红细胞无细胞核。

(2)需要在鸡血中加入抗凝剂——柠檬酸钠溶液,防止血液凝固。

(3)需除去鸡血中的血浆,因为血浆中无DNA。

特别提醒:不同生物的组织中DNA含量不同在选取材料时,应本着DNA含量高、材料易得、便于提取的原则。

3.实验过程

步骤:提取细胞核物质→溶解核内DNA→析出DNA粘稠物→滤取含DNA的粘稠物→DN A粘稠物的再溶解→过滤含有DNA的氯化钠溶液→提取含杂质较少的DNA→DNA的鉴定。

操作要点:(1)2次加蒸馏水:第一次是在是为了使血细胞吸水膨胀破裂,加水后必须充分搅拌使血细胞充分破裂;第二次加蒸馏水是为了稀释氯化钠溶液。

(2)3次加氯化钠溶液:第一次加氯化钠后,必须充分晃动烧杯,使二者混合均匀,加速染色质中DNA与蛋白质分离,使DNA充分游离并溶解在氯化钠溶液中;第二次加氯化钠溶液也是为了DNA的再溶解,这时溶液中的蛋白质含量已很少;第三次加氯化钠溶液还是为溶解DNA。

(3)6次搅拌:除最后一次搅拌外前5次搅拌均朝一个方向:,并且在析出DNA、DNA再溶解和提取中,各步搅拌都要轻缓玻璃棒,不要直插烧杯底部防止DNA分子断裂。

(4)3次过滤:第一次过滤,留滤液;第二次过滤,留粘稠物;第三次过滤,留滤液。注意这3次过滤都用纱布,获得沉淀物或粘稠物的通常为多层,获得滤液的纱布层数适当减少。

特别提醒:若以植物为实验材料,步骤上大致相同,在材料的处理上有几点不同:一是增加研磨步骤,目的是破坏细胞壁;二是加入洗涤剂,目的是溶解细胞膜及核膜;三是加食盐,可加速细胞膜及核膜的破裂。

4.实验注意事项

(1)用冷酒精浓缩和沉淀DNA时所用的95%酒精,必须经过充分预冷后才能使用,冷酒精与含 DNA的氯化钠溶液体积比是2:1 。如果用冷酒精处理后,悬浮于溶液中的丝状物较少,可将混合液放于冰箱中再冷却几分钟,然后再用玻璃棒卷起丝状物。

(2)鸡血细胞破碎以后释放的DNA,容易被玻璃容器吸附,由于细胞内DNA的含量本来就比较少,再被玻璃容器吸附去一部分,提取到的DNA就会更少。因此,实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管,这样可以减少提取过程中DNA的损失。

二、典型试题赏析

例1 下列关于“DNA的粗提取与鉴定”实验原理与方法的叙述,错误的是()

A.DNA在NaCl溶液中的溶解度随着溶液浓度的减小而减小

B.向鸡血细胞液中加入蒸馏水的目的是使其吸水涨破,释放出其中的DNA

C.向滤液中加入冷却酒精的目的是除去DNA中的杂质,纯化DNA

D.向初步纯化的DNA中加入二苯胺溶液,沸水浴后可观察到溶液显蓝色

解析:DNA在0.14 mol·L-1的NaCl溶液中溶解度最小,在低于或高于这个浓度的条件下溶解度都会增大。向鸡血细胞液中加入蒸馏水的目的是使其吸水涨破,释放其中的DNA。利用DNA不溶于酒精而蛋白质等杂质溶于酒精的原理,向滤液中加入冷却酒精可进一步将DNA与蛋白质分离开,获得较纯的DNA。鉴定DNA的方法是向DNA中加入二苯胺溶液,沸水浴加热,溶液变蓝。

答案:A

以上就是查字典生物网为大家整理的DNA的粗提取与鉴定考点聚焦,大家看了之后感觉还满意吗?希望对大家有所帮助。

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