2017年高考生物必备知识点：DNA的粗提取与鉴定_生物知识大全

2017年高考生物必备知识点：DNA的粗提取与鉴定: 来源: 查字典生物网| 2016-11-30 发表| 教学分类：生物知识大全

查字典生物网的小编给各位考生整理了2017年高考生物必备知识点：DNA的粗提取与鉴定，希望对大家有所帮助。更多的资讯请持续关注查字典生物网。

小编推荐：高考成绩不理想，专科成绩也能上本科

高考生物必备知识点：DNA的粗提取与鉴定一、实验原理

DNA在氯化钠溶液中的溶解度，是随着氧化钠的浓度的变化而改变的。当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L时，DNA的溶解度最大，浓度为 0．14 mol／L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出。

DNA不溶于95%的酒精溶液，但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精溶液。利用这一原理，可以进一步提取出含杂质较少的DNA。

DNA中含有脱氧核糖，能与二苯胺（沸水浴）反应生成蓝色物质，因此，二苯胺可以作为鉴定DNA的试剂。

高考生物必备知识点：DNA的粗提取与鉴定二、目的要求

1. 学会DNA的粗提取和鉴定的方法。

2. 观察提取出来的DNA物质的颜色和形状。

材料用具

材料：活鸡或鲜血鸡血。

仪器：离心机、恒温水裕锅、载玻片，玻璃棒，滤纸，滴管，量简（100 mL，l个），烧杯（100 mL，l个，50 mL、500 mL各 2个），试管（20 mL，2个），漏斗，试管夹，纱布。

试剂：酒精的体积分数为95％的溶液（实验前置于冰箱内冷却24 h），蒸馏水，柠檬酸钠的质量浓度为 0．1g／mL的溶液，氯化钠的物质的量浓度分别为 2 mol／L和0．015 mol/L的溶液，二苯胺试剂。

高考生物必备知识点：DNA的粗提取与鉴定三、方法步骤

实验前需要制备鸡血细胞液（由教师完成），制备的方法是：取柠檬酸钠的质量浓度为 0．1 g／mL的溶液（抗凝剂）100 mL，置于500 mL烧杯中。将宰杀活鸡流出的鸡血（约180 mL）注入烧杯中，同时用玻璃棒搅拌，使血液与柠檬酸钠溶液充分混合，以免凝血。然后，将血液倒入离心管内，用 1000 r／min的离心机离。2min，此时血细胞沉淀于离心管底部。实验时，用吸管除去离。心管上部的澄清液，就可以得到鸡血细胞液。

1.提取鸡血细胞的细胞核物质

将制备好的鸡血细胞液5 mL～10mL，注入到50 mL烧杯中。向烧杯中加入蒸馏水20 mL，同时用玻璃棒充分搅拌5 min，使血细胞加速破裂。然后，用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至500mL。取其滤液。

2.溶解细胞核内的DNA

将氯化钠的物质的量浓度为 2 mol的溶液40mL加入到滤液中，并摇动烧杯，使其混合均匀，这时DNA在溶液中呈溶解状态。

3.析出含DNA的粘稠物

沿烧杯内壁缓缓加入蒸馏水，同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状物呈什么颜色。继续加入蒸馏水，溶液中出现的粘稠物会越来越多。当粘稠物不再增加时停止加入蒸馏水（这时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于0.14 mol／L）。

4.滤取含DNA的粘稠物

用放有多层纱布的漏斗，过滤步骤3中的溶液至 500mL的烧杯中，含 DNA的粘稠物被留在纱布上。

5.将DNA的粘稠物再溶解

取 1个 50 mL烧杯，向烧杯内注入氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L的溶液 20mL。用钝头镊子将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中，用玻璃择不停地搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中。

6.过滤含有DNA的氯化钠溶液

取1个100 mL烧杯，用放有两层纱布的漏斗过滤步骤5中的溶液。取其滤液，DNA溶于滤液中。

7.提取含杂质较少的DNA

在上述滤过的溶液中，加入冷却的、酒精的体积分数为 95％的溶液 50mL（使用冷却的酒精，对DNA的凝集效果较佳），并用玻璃棒搅拌，溶液中会出现含杂质较少的丝状物。用玻璃棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。这种丝状物的主要成分就是DNA 。注意观察丝状物是什么颜色的。

8.DNA的鉴定

取两支20 mL的试管，各加入氯化钠的物质的量浓度为0．015 mol／L的溶液5 mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各加入4mlL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热 5 min，待试管冷却后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化。将观察的结果填写在《实验报告册》上。

高考生物必备知识点：DNA的粗提取与鉴定

1.DNA的粗提取与鉴定实验原理

(1)粗提取原理：在NaCl溶液浓度低于0.14mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而降低;在0.14mol/L时，DNA的溶解度最小;当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA溶解度又增大。

(2)纯化原理：DNA不溶于酒精，但细胞中的某些蛋白质溶于酒精。

(3)鉴定DNA原理：在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。

2.实验材料的选择及处理

(1)不选择猪血等哺乳动物的血液，因为哺乳动物成熟的红细胞无细胞核。

(2)需要在鸡血中加入抗凝剂——柠檬酸钠溶液，防止血液凝固。

(3)需除去鸡血中的血浆，因为血浆中无DNA。

特别提醒：不同生物的组织中DNA含量不同在选取材料时，应本着DNA含量高、材料易得、便于提取的原则。

3.生物实验过程

步骤：提取细胞核物质→溶解核内DNA→析出DNA粘稠物→滤取含DNA的粘稠物→DN A粘稠物的再溶解→过滤含有DNA的氯化钠溶液→提取含杂质较少的DNA→DNA的鉴定。